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Jolene Blalock commence sa carrière de mannequin à l'âge de 17 ans en Europe et en Asie. En 1998, elle fait ses débuts d'actrice dans un épisode de la sitcom "Les Dessous de Veronica". Elle apparaît ensuite dans le téléfilm "Jason et les Argonautes" en 2000, ainsi que dans des séries telles que "La croisière s'amuse, nouvelle vague" (1999), "Les Experts" (2000) et "JAG" (2001). Son rôle emblématique de T'Pol dans la série "Star Trek : Enterprise" débute en 2001 et se poursuit à travers les 98 épisodes jusqu'à l'annulation de la série en 2005.

En parallèle, elle joue le personnage d'Ishta dans deux épisodes de "Stargate SG-1" entre 2003 et 2004. Bien qu'elle ait été envisagée pour incarner un ancien amour de Sawyer dans la saison 2005-2006 de "Lost, les disparus", ce rôle a été modifié pour se concentrer sur Michael. En 2008, elle apparaît également dans le film "Starship Troopers 3 : Marauder".